Determinación de proteínas totales por el método de Biuret

Determinación de proteínas totales por el método 

de Biuret

 Objetivo:

En esta práctica vamos a determina las proteína que hay en una muestra, a través de un nuevo método; denominado método de Biuret. Los grupos _CO-NH- unidos entre sí dan una reacción con formación de color violeta con las sales cúpricas en medio alcalino, siendo la más representativa y simple la que da con el Biuret-NH2-CO-NH-CO-NH2. Es en la actualidad el método colorimétrico más exacto y simple para determinar las proteínas totales

 Materiales:

- Reactivo de Biuret
- Patrón
- Muestra (suero o plasma)
- Tubos de 3mL
- Cubetas de espectrofotometría
- Espectrofotómetro

- Equipamiento de laboratorio habitual

Procedimiento:

 ·1:Primero tenemos que rotular los tubos de ensayos de forma que; uno como blanco, otro como patrón y el último como muestra y pipetearemos en cada uno las siguientes cantidades:

 ·2: Ahora tenemos que incubar los tubos a 5 minutos a 37ºC; pero hay que controlar muy bien el tiempo, ya que si nos pasamos del tiempo, los reactivos se van degradando y nos otorgará falsos resultados

 ·3: Ahora podemos sacar los tubos del baño maría y ya podemos cuantificar la absorbancia con el espectrofotómetro

 Resultado:

 Una vez que tenemos listos los tubos de ensayos, tenemos que poner  el aparato a 540 nm y realizar un blanco. Recopilamos los datos y vemos que nos da los siguientes resultados:

 - A. patrón= 0.468 nm
 - A. muestra= 0.492 nm
Realizamos el siguiente cálculo:
(A. muestra/ A. patrón) x7= g/ dL de proteínas totales
 
(0.492/ 0.468) x7= 7.36 g/ dL

 Galería: