Determinación de la glucemia por el metodo de la hexokinasa

Determinación de la glucemia por el metodo de la hexokinasa

 Objetivo:

  En este ejercicio vamos a intentar determinar la cantidad de azúcar de una muestra; como

 la práctica anterior. No obstante ahora vamos a emplear otro método diferente. Basándonos en la capacidad de catalización de la fosforilación

 de la hexokinasa sobre la glucosa, provocando glucosa-6-fosfato, esta es reducida por la G6F-DH y origina NADH pariendo del NAD. El aumento de la  concentración de la NADH es proporcional a la concentración de glucosa que tiene la muestra.

 Materiales:

-       Espectrofotómetro a 340 nm

-       Cubeta de 1 cm

-       Equipamiento habitual

Procedimiento:

 ·1: Primero tenemos que preparar los reactivos de trabajo que vamos a emplear. Para ello vamos a vertir las enzimas que vienen en el kit sobre el tampón que también podemos encontrar en el mismo. 

 ·2: Ajustamos el espectrofotómetro  y realizamos un blanco para eliminar todas las posibles alteraciones que nos puedan falsear los datos

 · 3: Preparamos las cubetas siguiendo esta tabla;

	Blanco	Patrón	Muestra
Reactivo Trabajo (ML)	1	1	1
Patrón	---	10	---
Muestra	---	---	10

 ·4: Mezclamos e incubamos 5 minutos a 37º

 ·5: Por último, leemos la absorbancia del patrón y la muestra

 Cálculos:

 Tras haber hecho todo el procedimiento y haber hayado las observancias objetivos de estudio tenemos que hacer la siguiente fórmula para calcular la cantidad de glucosa en la muestra:

(A)  Muestra   X 100= mg/dL

(B)  Patrón

  Cuando sustituimos la fórmula por los datos nos dice que la muestra tiene un nivel de glucosa de 228,08 mg/dL

Galería: