Determinación De La Glucemia Por El Método De La Oxidasa-Peroxidasa

Determinación De La Glucemia Por El Método De La Oxidasa-Peroxidasa

 Objetivo:

 En esta práctica vamos a hacer la determinación de la glucosa, para ello vamos a intentar catalizar la glucosa oxidasa a ácido glucónico; originando H2O2 que podemos detectar con un aceptor cromogénico. En función de la intensidad formada podremos ver la glucosa presente en la muestra, ya que es proporcional

 Materiales:

-       Espectrofotómetro a 505 n,m

-       Cubetas de 1 Cm que dejen pasar la luz

-       Equipamiento habitual del laboratorio

 Procedimiento:

  ·1: Lo primero que tenemos que hacer es preparar los reactivos de trabajo; para ello vamos a coger las enzimas (R2) que vienen en el kit y las echamos sobre el tampón (R1).A continuación lo mezclamos  hasta disolver totalmente el contenido

 ·2: Realizamos un blanco en el espectrofotómetro empleando agua destilada

 ·3: Preparamos las cubetas para la práctica, siguiendo esta tabla:

	Blanco	Patrón	Muestra
Reactivo Trabajo (ML)	1	1	1
Patrón	---	10	---
Muestra	---	---	10

 ·4: Mezclamos e incubamos 10 mins. a 37º

 ·5: Leemos la absorbancia del patrón y de la muestra con el espectrofotómetro

 ·6: Tras recabar todos estos datos necesarios tenemos que hacer los datos pertinentes, siguiendo esta fórmula:

(A) Muestra   X 100= mg\dL de glucosa en muestra

(A) Patrón

 A la hora de hacer esta práctica, comprobamos que (A) Muestra= 0,756 y que (A) Patrón= 0,285

 Por tanto al pasarlo por la fórmula anterior, vemos que la cantidad de glucosa en la muestra es de 265,26 mg\dL

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