Cuantificación De Proteínas En Orina Con Ácido Sulfosalicílico Por Turbidimetria

Cuantificación De Proteínas En Orina Con Ácido Sulfosalicílico Por Turbidimetria

 Objetivo:

 En esta práctica vamos a ver la cantidad de proteínas que hay en una muestra de orina. Para ello vamos a añadir ácido sulfosalicílico a una solución de proteínas , originando precipitaciones en la propia muestra. Este precipitado se ve con gran turbidez, cuya intensidad se puede cuantificar mediante el uso del espectrofotómetro y averiguar la concentración de proteínas presentes.

 Materiales:

-       Tubos de ensayo de 10 mL

-       Cubetas de fotometría

-       Espectrofotómetro

-       Equipamiento habitual de laboratorio

 Procedimiento:

 ·1: Rotulamos todos los tubos de ensayo; al primero le ponemos BR (Blanco de reactivo), otro como BM (Blanco de muestra) , los siguiente cuatro les escribimos P1,P2,P3,P4 y para concluir al último le ponemos PB(Problema)

 ·2: Ahora tenemos que preparar las disoluciones,que vamos a emplear:

     D1- 1/50 (0,2 ml de patrón + 9,8 ml de SSF)= 140 mg/dL

     D2-1/100 (0,1 ml de patrón + 9,8 ml de SSF)= 70 mg/dL

     D3-1/200 (0,05 ml de patrón + 9,8 ml de SSF)= 35 mg/dL

     D4-1/400 (0,025 ml de patrón + 9,8 ml de SSF)= 17,5 mg/dL

 ·3: A continuación tenemos que rellenar los tubos que hemos rotulado previamente siguiendo esta tabla:

	BR	P1	P2	P3	P4	BM	PB
Suero fisiológico	0,5	--	--	--	--	2,0	--
D1	--	0,5	--	--	--	--	--
D2	--	--	0,5	--	--	--	--
D3	--	--	--	0,5	--	--	--
D4	--	--	--	--	0,5	--	--
Orina	--	--	--	--	--	0,5	0,5
Ácido sulfosalicílico	2,0	2,0	2,0	2,0	2,0	--	2,0

    (Todo en mL)

 ·4: Después agitamos los tubos por inversión y lo pasamo a las cubetas para su posterior uso en el espectrofotómetro

 ·5: Colocamos el espectrofotómetro en 660 nm y realizamos un blanco con el BR para calibrar. Medimos la absorbancia de P1,P2,P3,P4

 ·6: Ajustando a cero el fotómetro con el BM y a continuación medimos la absorbancia del PB

Resultados:

 Una vez que ya hemos realizado todos los procedimiento necesarios, hemos obtenido las siguientes absorbancias:

0,419	P1
0,178	P2
0,117	P3
0,038	P4

 Con estos datos tenemos que hacer una curva de calibración para poder meter la absorbancia de PB1 y de PB2 y ver qué concentración corresponde.

PB1	0,777
PB2	1,507

 No obstante como los datos son demasiados elevados, tuvimos que hacer una dilución de la muestra al 1/2 . Hechando 2,5 mL de suero fisiológico a la muestra, por lo que las absorbancia actuales son: PB1=0,266 y PB2= 0,667

 Al pasarlo a la curva podemos decir que PB2 tiene una concentración proteica de 165 mg/mL  y el PB1 tiene una concentración de 108 mg/mL.

 Galería: