Determinación Del HDL Colesterol

Objetivo:

En esta práctica vamos a estudiar el colesterol HDL a través de un reactivo precipitante de proteínas , para poder conseguir  precipitar las lipoproteínas de baja densidad,LDL y VLDL, quedándose en el sobrenadante las HDL y así determinar el colesterol ligado a las mismas.

Materiales:

-Pipetas y puntas

-Cubetas de espectrofotometría

-Espectrofotómetro

-Centrífuga y tubos eppendorf

-Tubos de ensayo

-Gradilla

-Reactivos proporcionados por el kit

-Suero o plasma como muestra (hemos usado suero)

Procedimiento:

-1: Primero tenemos que mezclar 1mL de suero con 0,1 mL del reactivo A y dejarlo reposar a temperatura ambiente 10 minutos.

-2: A continuación  centrifugamos durante 2 minutos a 15.000 rpm y recoger el sobrenadante

-3: Después en un tubo de ensayo prepararemos, el blanco de reactivo (1 mL del reactivo B) y la muestra problema (1mL del reactivo B colesterol) + 0,02 mL del sobrenadante anterior.

-4: Por último lo mezclamos y lo dejamos incubar 10 minutos a tª ambiente, para poder medir con el espectrofotómetro a 505 nm.

Resultados:

Una vez que hemos medido, obtenemos estos resultados:

A muestra: 0,260 nm

A patrón: 0,391 nm

Realizamos el siguiente cálculo:

Am/Ap x200= mg/dL, en este caso el resultado es de 133 mg/dL.

Con este dato también podemos calcular el colesterol LDL, gracias a la siguiente fórmula:

LDL colesterol = colesterol total – (triglicéridos/5) – HDL colesterol

Galería: