Seminograma

Objetivo:

En esta práctica vamos a hacer el estudio del semen, el seminograma.Vamos a realizar el análisis físico de la muestra (licuación, volumen, color, viscosidad, filancia y pH), el examen microscópico (movilidad, vitalidad, recuento y morfología) y la determinación de ciertas sustancias químicas y estudios inmunológicos. Tenemos que prestar especial atención a que la muestra sea reciente y se haya cumplido las condiciones adecuadas previas a la extracción de la muestra

Materiales:

-Frasco estéril

-Baño termostático

-Portaobjetos

-Cubreobjetos

-Cámara de Neubauer

- Tiras indicadoras de pH

-Tinción de panóptico rápido

-Nigrosina al 10%

-Muestra de semen

Procedimiento:

-Examen macroscópico:

·Licuación: se obtiene por observación, manteniendo la muestra en el baño a 37ºC

·Volumen: en una probeta graduada o tubo de ensayo graduado, ambos precalentados a 37ºC

·Color: Por observación

·Viscosidad: con Pipeta Pasteur, viendo como gotea la muestra.

·Filancia: Con ayuda de una varilla de vidrio

·pH: con tiras de papel indicador, dejando caer una gota sobre ellas, esperando unos segundos y leyendo el color en comparación con la carta de colores del envase

Para esta práctica usamos 3 muestras distintas.

· En primer lugar tenemos que observar los volúmenes que tiene cada muestra Empezaremos por observar el volumen de las muestras

*Muestra 1: 1,5 mL

*Muestra 2: 4,5 mL

*Muestra 3: 5 mL

Los tres valores se encuentran dentro de lo normal.

· Luego hacemos la licuación de la muestra y vemos que todas se encuentra dentro de los valores normales

· Ahora pasamos a la viscosidad se encuentra también dentro de los valores normales, excepto en la muestra número 1, que se encuentra ligeramente aumentada.

· A continuación miramos el pH también se encuentra dentro de la normalidad ( muestra 1: 8, muestra 2: 7'7 , muestra 3: 8).

El color también es normal en las tres muestras, y la transparencia igual.

    -Examen microscópico:

·Movilidad

Dejamos caer una gota de semen sobre un porta precalentado a 37ºC, colocar el cubreevitando la formación de burbujas y observar con objetivo 40x. Contaremos un total de 100 y nos da los siguientes datos:

Progresivos: 10 %

No progresivos: 9 %

Inmóviles: 81 %

(muestra 1)

·Vitalidad:

Mezclar 50 μl de semen con 50 μl de eosina azulada al 1%, esperar 20-30 segundos y añadir 100 μl de nigrosina al 10%. Agitar y realizar una extensión sobre un portaobjetos. Tras el secado de la preparación, observar al microscópio con objetivo de inmersión 100x:

Vivos (no teñidos) = 11%

Muertos (teñidos) = 89%

·Recuento

Diluimos el semen al 1/10.

Montamos y cargamos la cámara de Neubauer y, tras 2 minutos de reposo en cámara húmeda, la ponemos al microscopio con el objetivo de 40x y contamos los 16 cuadraditos de una de las esquinas (zona para leucocitos):

Espermatozoides contados (N): 373373 x 10 x 10.000= 37.300.000 espermatozoides/ml

·Morfología

Realizamos una extensión sobre un porta con una gota de semen y dejamos que seque perfectamente. Posteriormente fijamos con metanol y teñimos con panóptico rápido. Tras secar, pasamos la preparación al microscopio con el objetivo de 100x y observamos.

Espermatozoides normales: 92%

Espermatozoide anormales: 8%

Galería/Resultado:

Cuerpos Reductores En Heces

Objetivo:

En esta práctica vamos a emplear el método de Fehling, para poder la presencia de glucosa en heces

Materiales:

- Muestra de heces

- Solución salina

- Pipetas pasteur

- Reactivos de fehling

- Mechero

Procedimiento:

-1:Primero mezclamos 2g de heces con 10mL de suero salino, y centrifugamos 5 minutos a 1500 rpm

-2:Ahora cogemos 3 mL del sobrenadante y los pasamos a los tubo de ensayo de vidrio

-3: Por último añadimos 1 mL del reactivo de Fehling A y otro del reactivo de Fehling B (color azul) y calentamos con el mechero,hasta que vire de color

Resultado:

Una vez que hayamos concluido todo el procedimiento, tenemos que ver a que color a cambiado el tubo que hemos calentado. En nuestro caso se a puesto de color azul, por tanto vemos que la prueba a dado negativo.

Galería:

Sangre Oculta En Heces

Objetivo:

 Esta práctica vamos a detectar la presencia de sangre en una muestra de heces, a través de un inmunoensayo rápido. Este test tiene la ventaja de que es muy exacto y específico por lo que no hay que hacer restricciones en la dieta que puedan proporcionar un falso positivo. Los anticuerpos contra la hemoglobina humana se quedarán inmovilizados en la zona de la línea de prueba de la membrana

Materiales:

- Test de detección de melena

- Heces como muestra

Procedimiento:

 -1: Primero tenemos que quitar el tapón, que contiene un aplicador el cual tendremos que introducir 3 veces en la muestra.

-2: Ahora insertamos el aplicador de nuevo en su envase para que se mezcle con el búfer diluyente que hay en su interior y agitamos durante unos 10 segundos.

-3: Ahora quitamos la tapa blanca y rompemos la punta del dispositivo, ponemos el tubo en vertical y añadimos 3 gotas de la solución en el pocillo de muestra

-4: Por último; le concedemos 5 minutos para poder interpretar el resultado

Resultado:

  Una vez realizada esta prueba, vemos que en el resultado final aparecen dos líneas rojas, lo que significa que la prueba a dado positivo, es decir esta muestra si presenta sangre

Galería:

Digestión De Principios Inmediatos En Heces

Objetivo:

En esta práctica vamos a hacer un estudio de los principios de las heces. Estudiaremos la muestra tanto microscopicamente como macroscopicamente, intentaremos buscar sobre todo artefactos y estructuras básicas que suele a ver en las heces. Además haremos tinciones especiales para ayudarnos a la mejor identificación

Materiales:

-Vaso de plástico desechable

-Espátula o depresor de madera

-Portaobjetos y cubreobjetos

-Microscopio

-Mechero Bunsen

-Solución de lugol diluido al 1/3 en agua destilada

-Solución Sudan III: 0.5 g de Sudan III + 45 ml de etanol 96º. Calentar suavemente y dejar enfriar. Filtrar si es necesario

-Solución Sudan III con acético: 0.2 g de Sudan III + 10 ml de etanol 96º + 90 ml de acético. Filtrar si es necesario

-Agua destilada

Procedimiento:

 -1: Primero, en una placa de Petri tenemos que poner una pequeña cantidad de las heces con la espátula y las homogeneizamos con agua destilada

-2: Ahora tomamos una gota de la mezcla que hemos preparado y la mezclamos en un porta con dos gotas de lugol, tapamos con un cubre y observamos con el microscopio

-3:Luego cogemos otra gota de la disolución de la muestra y la depositamos en un porta junto a tres gotas de Sudán III, tapamos con un cubre y calentamos suavemente hasta que hierva. Observamos en caliente con un objetivo seco.

-4:Por último cogemos otra gota,la tapamos con el cubre y la miramos por el microscopio, para así, poder ver un porta en fresco

Galería:

Determinación cuantitativa de GPT (ALT)

Objetivo:

En esta práctica vamos a hacer una determinación cuantitativa de GPT (ALT), la cual es una enzima que se encuentra principalmente en las células del hígado y riñón. Se suele estudiar en caso de enfermedades del hígado

Material:

-Reactivos incluidos en el kit

-Espectrofotómetro

-Cubetas de espectrofotometría

-Material habitual de laboratorio

-Suero o plasma de muestra

Procedimiento:

 -1: Primero vamos a ajustar el espectrofotómetro a cero utilizando agua destilada

-2:Después;  pipeteamos 1mL de reactivo de trabajo+ 0,1 mL de muestra en una cubeta, lo mezclamos y lo incubamos durante 1 min.

-3: Por último leeremos la absorbancia inicial de la muestra , y vamos leyendo la absorvancia cada minuto, en un periodo de 3 mins total

Resultado:

Una vez leída las absorbancias, nos da estos datos:

A1: 1,634  

A2:1,602

A3: 1,575

A4:1,548

Hacemos el siguiente cálculo:

promedio de la diferencia de absorbancia/ min x 1750= U/L

Y sale de resultado: 50,05 U/L

Galería:

Determinación Cuantitativa De Creatinina

Objetivo:

En esta práctica vamos a hacer una determinación cuantitativa de la creatinina, para ellos emplearemos el método de Jaffé, que es un método colorimétrico y cinético; este se basa en la reacción de la creatinina con el picrato de sodio. La creatinina reacciona con el picrato alcalino formando un complejo rojizo. el intervalo de tiempo escogido para las lecturas permite eliminar gran parte de las interferencias conocidas del método .en función de la concentración de creatinina en la muestra ensayada, cobrará una mayor  coloración

Materiales:

- Reactivos proporcionados por el kit.

-Micropipetas

- Cubetas de espectrofotometría

-Espectrofotómetro

-Tubos de ensayo

-Gradilla

Procedimiento:

-1: Primero tenemos que preparar los reactivos y rotular tubos de ensayo (patrón, blanco y muestra)

-2: Ahora tenemos que añadir estas cantidades:

-3: Por último en cuanto mezclemos los reactivo,tenemos que medirlos en e espectrofotómetro, ya que hay que medir la reacción en dos puntos diferentes, es decir, a 30 segundos y a 90 segundos.

Resultados:

Tras haber hecho la medición, hemos sacado estos datos:

Blanco: A1= 0,276 A2=0,278

Patrón: A1= 0,296 A2=0,314

Muestra: A1= 0,602 A2= 0,662

Realizamos el siguiente cálculo:

(Am2-Am1) - (Ab2-Ab1)/ (Ap2-Ap1)- (Ab2-Ab1) x2= mg/dL

Lo que nos da: 3,86mg/dL

Galería:

Determinación Del HDL Colesterol

Objetivo:

En esta práctica vamos a estudiar el colesterol HDL a través de un reactivo precipitante de proteínas , para poder conseguir  precipitar las lipoproteínas de baja densidad,LDL y VLDL, quedándose en el sobrenadante las HDL y así determinar el colesterol ligado a las mismas.

Materiales:

-Pipetas y puntas

-Cubetas de espectrofotometría

-Espectrofotómetro

-Centrífuga y tubos eppendorf

-Tubos de ensayo

-Gradilla

-Reactivos proporcionados por el kit

-Suero o plasma como muestra (hemos usado suero)

Procedimiento:

-1: Primero tenemos que mezclar 1mL de suero con 0,1 mL del reactivo A y dejarlo reposar a temperatura ambiente 10 minutos.

-2: A continuación  centrifugamos durante 2 minutos a 15.000 rpm y recoger el sobrenadante

-3: Después en un tubo de ensayo prepararemos, el blanco de reactivo (1 mL del reactivo B) y la muestra problema (1mL del reactivo B colesterol) + 0,02 mL del sobrenadante anterior.

-4: Por último lo mezclamos y lo dejamos incubar 10 minutos a tª ambiente, para poder medir con el espectrofotómetro a 505 nm.

Resultados:

Una vez que hemos medido, obtenemos estos resultados:

A muestra: 0,260 nm

A patrón: 0,391 nm

Realizamos el siguiente cálculo:

Am/Ap x200= mg/dL, en este caso el resultado es de 133 mg/dL.

Con este dato también podemos calcular el colesterol LDL, gracias a la siguiente fórmula:

LDL colesterol = colesterol total – (triglicéridos/5) – HDL colesterol

Galería:

Determinación Cuantitativa De Triglicéridos

Objetivo:

En esta práctica vamos a hacer la determinación cuantitativa de trigliceridos de una muestra. Emplearemos un método enzimático colorimétrico (GPO-POD).al igual que en la practica anterior; y nos basaremos en esta reacción:

Luego mediremos con el espectrofotómetro gracias al color que cogerán las cubetas por dicha reacción

Materiales:

-Cubetas de espectrofotometría

- Espectrofotometría

-Suero como muestra

-Micropipetas

-Reactivos incluidos en el kit

-3 tubos de 3 mL

-Gradilla

Procedimiento:

- 1: Primero preparamos el reactivo de trabajo disolviendo el contenido del vial R2 en el vial R1 Tampón.

- 2: Luego tenemos que colocar los tubos rotulados en la gradilla y añadir en cada tubo:

- 3: Luego dejaremos incubar 10 minutos a tª ambiente

- 4: Por último medimos la cubeta con el espectrofotómetro empleando una longitud de onda de 505 nm

Resultados:

Una vez que hemos medido, nos da estos datos:

Absorbancia muestra: 0,207

Absorbancia patrón: 0,175

Realizamos el siguiente cálculo: Am/ AP x200= mg/dL de TG en muestra

Y obtenemos el siguiente resultado: 236mg/dL

Galería: